УО «Пинский государственный медицинский колледж»
Дисциплина «Сестринское дело и манипуляционная техника»
Специальность «Лечебное дело»
Учебно-информационный материал
К практическим занятиям
По разделу № 8 «Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования»
Практические занятия №№ 25-26
Рассмотрен, обсужден и утвержден
На заседании цикловой комиссии
«Сестринского дела и манипуляционной техники,
Скорой и неотложной медицинской помощи»
Протокол № ____ от ____________20 г.
Подготовка пациентов к лабораторным и инструментальным методам исследования
Тема: « Подготовка пациентов к лабораторным методам исследования»
Практическое занятие № 26
«Правила подготовки пациента сбор материала для лабораторных исследований».
Вопросы:
1. Характеристика основных лабораторных методов исследования мокроты.
2. Подготовка пациента, собор мокроты на общий анализ, направить материал в лабораторию.
3. Подготовка пациента, собор мокроту на бактериологическое исследование, направление материал в лабораторию.
4. Характеристика основных лабораторных методов исследования мочи.
5. Подготовка пациента и собор мочи на общий анализ.
6. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Зимницкому;
7. Подготовка пациента и собор мочи для исследования на сахар.
8. Подготовка пациента и собор мочи для исследования по Нечипоренко.
9. Характеристика основных лабораторных методов исследования кала.
10. Подготовка пациента для сбора кала на скрытую кровь, собор и направление материал на исследование;
11. Подготовка пациента, собор кала на яйца гельминтов и направление материал на исследование.
12. Правила взятия мазков из зева и носа и направление на исследование.
13. Правила оформления направления на исследование.
14. Вопросы и практические задания для самоконтроля
Характеристика лабораторных методов исследования мокроты
Мокрота – это патологический секрет дыхательных путей. В диагностике заболеваний дыхательной системы важное место занимает исследование мокроты, позволяющее судить о характере патологического процесса. При общеклиническом исследовании мокроты определяют ее физико-химическое свойства и клеточный состав. При бактериологическом исследовании мокроты выявляют возбудителя патологического процесса, а также производят подбор антибиотика, эффективного при данном возбудителе.
Мокро́та (лат. sputum) - отделяемый при отхаркивании патологический секрет трахеобронхиального дерева с примесью слюны и секрета слизистой оболочки полости носа и придаточных пазух носа. Мокрота является ценным диагностическим материалом. Исследование мокроты:
ü Макроскопическое – обращают внимание на: характер мокроты, количество, цвет, запах, консистенцию, слоистость, наличие различных включений
ü Микроскопическое – проводится в свежих неокрашенных и фиксированных окрашенных препаратах. Элементы мокроты, которые обнаруживаются в нативном препарате: клеточные элементы, волокнистые образования, кристаллические образования.
ü Бактериоскопическое – позволяет выделить возбудителя заболевания в чистом виде при посеве мокроты на питательные среды, определить вирулентность и лекарственную устойчивость (чувствительность) выделенного микроорганизма, что необходимо для рационального подбора антибактериальных средств.
ü Цитологическое – с учетом соотношения ее клеточных элементов имеет значение для оценки активности заболеваний бронхов и легких, помогает установить преимущественность инфекционного или аллергического воспаления.
Правила техники безопасности при работе с биоматериалом
В экскрементах, носоглоточных выделениях, мокроте, моче и рвотных массах концентрация ВИЧ очень низка или ВИЧ не обнаруживается.
Однако соблюдать меры предосторожности необходимо, т.к. это позволит предотвратить передачу от пациентов других инфекционных агентов.
Меры предосторожности :
1. Избегайте непосредственного контакта с биологическими жидкостями. Работайте только в перчатках. Не допускайте боя лабораторной посуды и травм осколками стекла.
2. Обеззараживайте выделения пациентов перед сливом в канализацию.
3. Тщательно дезинфицируйте лабораторную посуду, судна, мочеприемники, петли для забора кала и т.д.
4. В случае попадания биоматериала на кожу, одежду, слизистые, немедленно провести обработку, следуя рекомендациям из приказа №351.
3.1. Соблюдение ТБ в биологической лаборатории.
3.1.1. Инструкция по охране труда для учителя.
3.1.1.1. К работе допускаются лица обоего пола, достигшие 18 лет, имеющие педагогическое образование, прошедшие медицинский осмотр.
3.1.1.2. Учитель должен:
Знать свои должностные обязанности и инструкции по ОТ;
Пройти вводный инструктаж и инструктаж на рабочем месте;
Руководствоваться в работе правилами внутреннего распорядка;
Режим его труда и отдыха определяется графиком работы.
3.1.1.3. Опасность возникновения травм:
При пользовании стеклянной лабораторной посудой;
При работе с колющими и режущими инструментами;
При работе с различными растворами;
При включении электроприборов, аппаратуры ТСО (технических средств обучения);
При работе с инсектицидами;
При наличии в кабинете ядовитых растений.
3.1.1.4. При санитарной обработке растений пользоваться только мыльным и табачным растворами.
3.1.1.5. О случаях травматизма сообщать администрации школы.
3.1.1.6. Соблюдать личную гигиену и технику безопасности.
3.1.1.7. При проведении лабораторно-практических занятий работать в спецодежде (халат, перчатки).
3.1.1.8. Не выращивать в кабинете ядовитые растения.
3.1.1.9. Нести ответственность (административную, материальную, уголовную) за нарушение требований инструкций по ОТ.
3.1.1.10. Не допускать проведения в кабинете занятий по другим предметам и различных внеурочных мероприятий.
Требования безопасности перед началом работы
3.1.1.11. Проверить готовность кабинета и безопасность рабочих мест к учебным занятиям.
3.1.1.12. Проверить наличие необходимого лабораторного оборудования и препаратов.
3.1.1.13. Проверить исправность электроосвещения.
3.1.1.14. Проветрить кабинет.
Требования безопасности во время работы
3.1.1.15. Соблюдать личную гигиену и безопасность.
3.1.1.16. Следить за дисциплиной и порядком в кабинете.
3.1.1.17. Не допускать учащихся к включению и переноске аппаратуры ТСО.
3.1.1.18. Не допускать учащихся к переноске лабораторного оборудования и препаратов.
3.1.1.19. Выдать учащимся рабочую одежду (халаты).
3.1.1.20. Не оставлять учащихся без присмотра во время практических занятий.
3.1.1.21. Осколки стеклянной, фаянсовой посуды убирать щёткой и совком.
3.1.1.22. Следить за санитарно-гигиеническим состоянием кабинета и рабочих мест.
Требования безопасности в аварийных ситуациях
3.1.1.23. В случае возникновения аварийных ситуаций принять меры к эвакуации учащихся.
3.1.1.24. Сообщить о происшедшем администрации школы, при пожаре известить службу 01.
3.1.1.25. При внезапном заболевании учащегося вызвать медработника, сообщить родителям.
Требования безопасности по окончании работы
3.1.1.26. Отключить от электросети аппаратуру ТСО.
3.1.1.27. Проверить уборку рабочих мест.
3.1.1.28. Принять от учащихся рабочую одежду.
3.1.1.29. Перенести в лаборантскую посуду, оборудование и препараты.
3.1.1.30. После экскурсии сверить численность присутствующих учащихся.
3.1.1.31. Проветрить кабинет.
3.1.1.32. Выключить электроосвещение, закрыть кабинет на ключ.
3.1.1.33. Обо всех недостатках, обнаруженных во время учебных занятий, сообщить администрации.
3.1.2. Инструкция по охране труда для учащихся.
Общие требования безопасности.
3.1.2.1. К практическим работам допускаются учащиеся, которые прошли медицинский осмотр, специальное обучение, инструктажи по охране труда, о безопасных методах работы. Эти знания периодически проверяют, закрепляют.
3.1.2.2. Проведение инструктажей и проверка знаний по вопросам техники безопасности (охраны труда) производится в пределах учебной программы и оформляется соответственно в журнале инструктажа.
3.1.2.3. Выполнение данной инструкции является обязательным для всех лиц, которые выполняют практические работы по биологии.
3.1.2.4. Тщательное соблюдение правил личной гигиены и санитарных норм на рабочем месте.
3.1.2.5. В кабинете разрешается проводить эксперименты, только предусмотренные учебными программами. Запрещается выполнять работы, не связанные с заданием или указанием учителя.
3.1.2.6. Надеть спецодежду, застегнуть её на все пуговицы, волосы спрятать под головной убор.
3.1.2.7. Освободить рабочее место от всех ненужных для проведения работы предметов и материалов.
3.1.2.8. Проверить наличие и надёжность посуды, приборов, инструментов, материалов, необходимых для выполнения задания.
3.1.2.9. Начинать выполнять задания только с разрешения учителя.
3.1.2.10. Выполняйте только ту работу, которую поручил учитель.
3.1.2.11. Пользуясь спиртовкой, не задувайте пламя, а гасите его, накрывая специальным колпачком; не вынимайте из спиртовки после её зажигания горелки с фитилём; не зажигайте одну спиртовку от другой - всё это угрожает пожаром.
3.1.2.12. При пользовании скальпелем, лезвием для безопасной бритвы, иглой, никогда не направляйте режущие или колющие части этих инструментов на себя, других людей, чтобы избежать ранений.
3.1.2.13. Нагревая жидкости в пробирке, пользуйтесь только специальным держателем к ней, а не бумажной полоской. Чтобы избежать ожогов, не направляйте отверстие пробирки на себя или на других людей.
3.1.2.14. Пользуясь кислотами или щелочами, наливайте их только в стеклянную посуду. Кислоту вливайте в воду, а не наоборот.
3.1.2.15. При использовании порошкоподобных химических веществ, набирайте их только специальной ложечкой (не металлической), не дотрагиваясь до порошка руками. Помните, что многие из этих веществ ядовиты. То же самое касается удобрений, которые используются для подкормки растений.
3.1.2.16. Все жидкости, которые остаются после проведения лабораторных занятий с использованием химических веществ, сливайте в стеклянные чашки или стаканы, специально для этого предназначенные (не сливайте их в водопроводную раковину).
3.1.2.17. Аккуратно обращайтесь со стеклянной посудой. В случае если она разбивается, не собирайте осколки руками, а сметайте их щёточкой в предназначенный для этого совок.
3.1.2.18. При изготовлении препаратов для рассматривания их под микроскопом очень аккуратно берите стёклышко большим и указательным пальцами правой руки за края, расположите его параллельно предметному стеклу, которое вы держите в левой руке, в непосредственной близости к нему, а потом выпустите стёклышко из пальцев, чтобы оно свободно легло на препарат.
3.1.2.19. Уберите рабочее место.
3.1.2.20. Не мойте стеклянную посуду мылом, она становится скользкой, и её легко упустить и разбить.
3.1.2.21. После окончания работы обязательно тщательно вымойте руки с мылом.
3.1.2.22. Не выходите из кабинета (класса) без разрешения учителя.
3.1.2.23. В случае выявления неисправностей в приборах, установках немедленно остановите работу и оповестите учителя.
3.1.2.24. В случае травмы или ожога сразу же обратитесь к учителю.
3.1.3. Техника безопасности при проведении экскурсий и полевых работ.
3.1.3.1. На экскурсии допускаются учащиеся, прошедшие медицинский осмотр и инструктаж по технике безопасности.
3.1.3.2. Опасность возникновения травм:
При переходе улиц и перекрёстков;
При сборе ядовитых растений;
При сборе ядовитых и опасных насекомых и животных;
При нарушении инструкции по ТБ.
3.1.3.3. У руководителя экскурсии должна быть аптечка, укомплектованная необходимыми медикаментами и перевязочными средствами для оказания первой помощи пострадавшим.
3.1.3.4. Учебная экскурсия не должна превышать заявленного в документах времени.
3.1.3.5. Необходимо знать местные ядовитые растения и опасных ядовитых животных.
3.1.3.6. Иметь запас чистой питьевой воды.
3.1.3.7. Не пользоваться химическими растворами (серный эфир, хлороформ) для замаривания насекомых.
Требования безопасности перед началом занятий.
3.1.3.8. Приготовить необходимые учебные принадлежности (папки, лопатки, булавки, коробки).
3.1.3.9. Внимательно выслушать инструктаж по ТБ при проведении экскурсии.
3.1.3.10. Получить учебное задание у руководителя.
3.1.3.11. Выходить из кабинета спокойно, не торопясь.
3.1.3.12. Одеться соответственно погоде.
3.1.3.13. При жаркой солнечной погоде надеть головной убор.
3.1.3.14. Не начинать движение без указания учителя-руководителя.
Требования безопасности во время занятий.
3.1.3.15. Выполнять все действия только по указанию учителя.
3.1.3.16. Идти только по маршруту, указанному учителем, не нарушая правил дорожного движения при переходе улиц, перекрёстков.
3.1.3.17. Выполнять только работу, определённую учебным заданием.
3.1.3.18. Не делать резких движений, не трогать посторонних предметов.
3.1.3.19. Соблюдать порядок и дисциплину, провести повторную перекличку на месте.
3.1.3.20. Без разрешения учителя никуда не отлучаться.
3.1.3.21. Двигаться компактной группой, не теряя никого из виду.
3.1.3.22. Не пить воду из открытых водоёмов.
3.1.3.23. Не пробовать на вкус собранные растения.
3.1.3.24. Не выкапывать растения незащищёнными руками, пользоваться лопатками.
3.1.3.25. Не ходить во время экскурсии босиком.
Требования безопасности в аварийных ситуациях.
3.1.3.26. При плохом самочувствии сообщить об этом учителю.
3.1.3.27. При резком ухудшении погоды, по указанию учителя, немедленно прекратить занятия, группе вернуться в учебный кабинет.
3.1.3.28. При получении травмы немедленно сообщить о случившемся учителю.
Требования безопасности по окончании занятий.
3.1.3.29. Проверить присутствие всех своих товарищей.
3.1.3.30. Просмотреть свои записи в черновиках по результатам экскурсии. Аккуратно сложить собранный материал в папки, гербарии и т.п. в указанное учителем место.
3.1.3.31. Проверить безопасность рабочего места.
3.1.3.32. Вымыть лицо и руки с мылом.
3.1.4. ТБ при работе с микроорганизмами.
3.1.4.1. Учащиеся должны четко выполнять инструкции учителя к лабораторным занятиям. Учащимся, склонным к аллергическим реакциям или имеющим медицинские противопоказания, запрещается работать с биообъектами без разрешения врача.
3.1.4.2. В лаборатории запрещается принимать пищу, пить напитки.
3.1.4.3. Приступать к занятиям обязательно в хлопчатобумажном халате и одноразовых перчатках.
3.1.4.4. Работу с микроорганизмами проводят только на лабораторных столах с кафельным покрытием.
3.1.4.5. Работу с биологическим материалом проводить специальными инструментами, используя лабораторную посуду. Запрещается трогать культуры руками!
3.1.4.6. При случайном попадании биологического материала (особенно микроорганизмов) на стол или руки, обработать дезинфекцирующим раствором (например, хлорамином).
3.1.4.7. Строго соблюдать правила обращения с химическими реактивами и красителями.
3.1.4.8. Поскольку некоторые микроорганизмы, особенно споры грибов, являются аллергенами, не допускать их распыления: не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки, колбы с культурами микроорганизмов. При работе со спорулирующими грибами следует защитить органы дыхания одноразовой защитной маской.
3.1.4.9. Суспензии микроорганизмов или реактивы набирать только с помощью пипетки с насадкой, в наконечник которой вложен ватный шарик для предотвращения засасывания суспензии из наконечника внутрь пипетки.
3.1.4.10. Все предметы, использованные при работе с живыми культурами, должны быть обеззаражены либо обжиганием в пламени горелки (петли, иглы), либо погружением в дезинфицирующий раствор (предметные и покровные стекла, пипетки, шпатели).
3.1.4.11. Все засеянные пробирки, чашки Петри сдаются учителю для помещения в термостат. Отработанный материал (пробирки, чашки Петри) помещается в определенные емкости по указанию учителя для их дальнейшего обеззараживания.
3.1.4.12. В лаборатории необходимо поддерживать порядок и чистоту. По окончании занятий учащиеся обязаны снять защитную одежду, привести в порядок рабочее место и сдать лаборанту или учителю, вымыть руки с использованием дезинфицирующих средств.
3.1.4.13. После окончания работ необходимо проветрить помещение.
3.1.5. Техника безопасности при проведении демонстрационных опытов по биологии.
Общие требования безопасности .
3.1.5.1. К проведению демонстрационных опытов по биологии допускаются педагогические работники в возрасте не моложе 18 лет, прошедшие инструктаж по охране труда, медицинский осмотр и не имеющие противопоказаний по состоянию здоровья. Учащиеся к подготовке и проведению демонстрационных опытов по биологии не допускаются.
3.1.5.2. Лица, допущенные к проведению демонстрационных опытов по биологии, должны соблюдать правила внутреннего трудового распорядка, расписание учебных занятий, установленные режимы труда и отдыха.
3.1.5.3. При проведении демонстрационных опытов по биологии возможно воздействие на работающих следующих опасных и вредных производственных факторов:
Химические ожоги при попадании на кожу и в глаза растворов кислот, щелочей и других едких веществ;
Термические ожоги при неаккуратном обращении со спиртовками;
Порезы и уколы рук при небрежном обращении с лабораторной посудой, режущим и колющим инструментом.
3.1.5.4. Лаборатория биологии должна быть укомплектована медицинской аптечкой с набором необходимых медикаментов и перевязочных средств.
3.1.5.5. При проведении демонстрационных опытов по биологии соблюдать правила пожарной безопасности, знать места расположения первичных средств пожаротушения. Лаборатория биологии должна быть оснащена первичными средствами пожаротушения: огнетушителем пенным и углекислотным, ящиком с песком.
3.1.5.6. О каждом несчастном случае пострадавший или очевидец несчастного случая обязан немедленно сообщить администрации учреждения. При неисправности оборудования, приспособлений и инструмента прекратить работу и сообщить администрации учреждения.
3.1.5.7. В процессе работы соблюдать правила личной гигиены, содержать в чистоте рабочее место.
3.1.5.8. Лица, допустившие невыполнение или нарушение инструкции по охране труда, привлекаются к дисциплинарной ответственности в соответствии с правилами внутреннего трудового распорядка и, при необходимости, подвергаются внеочередной проверке знаний норм и правил охраны труда.
Требования безопасности перед началом работы.
3.1.5.9. Подготовить к работе необходимое оборудование, инструменты, препараты, проверить их исправность, убедиться в целостности лабораторной посуды и приборов из стекла.
3.1.5.10. Тщательно проветрить помещение лаборатории биологии.
Требования безопасности во время работы.
3.1.5.11. При использовании режущих и колющих инструментов (скальпелей, ножниц, препаровальных игл и пр.) соблюдать осторожность, во избежание порезов и уколов брать инструмент только за ручки, не направлять их заостренные части на себя или на других учащихся.
3.1.5.12. Соблюдать осторожность при работе с лабораторной посудой и приборами из стекла. Тонкостенную лабораторную посуду следует укреплять в зажимах штативов осторожно, слегка поворачивая вокруг вертикальной оси или перемещая вверх-вниз. Брать предметные стекла за края легко во избежание пореза пальцев.
3.1.5.13. При пользовании спиртовкой для нагревания жидкостей беречь руки от ожогов. Нагревание жидкостей следует производить только в тонкостенных сосудах (пробирках, колбах и пр.). Отверстие пробирки или горлышко колбы при их нагревании не направлять на себя и на учащихся. При нагревании жидкостей не наклоняться над сосудами и не заглядывать в них.
3.1.5.14. При нагревании стеклянных пластинок необходимо сначала равномерно прогреть всю пластинку, а затем вести местный нагрев.
3.1.5.15. Кипячение горючих жидкостей на открытом огне запрещается.
3.1.5.16. Соблюдать осторожность при работе с влажными и сухими препаратами, не давать учащимся трогать руками и нюхать растения, грибы и колючие растения.
3.1.5.17. При работе с химреактивами не брать их руками, твердые реактивы из склянок набирать специальными ложечками, шпателями.
3.1.5.18. Поддерживать порядок на рабочем месте, не загромождать стол посторонними предметами.
Требования безопасности по окончании работы.
3.1.5.19. Привести в порядок рабочее место, убрать в лаборантскую в шкафы оборудование, приборы, инструменты, препараты, химреактивы.
3.1.5.20. Отработанные водные растворы реактивов слить в закрывающийся стеклянный сосуд вместимость не менее 3 л с крышкой для их последующего уничтожения.
3.1.5.21. Проветрить помещение кабинета и тщательно вымыть руки с мылом.
Требования безопасности в аварийных ситуациях.
3.1.5.22. При разливе легковоспламеняющейся жидкости и ее воспламенении немедленно удалить учащихся из кабинета, сообщить о пожаре администрации учреждения и в ближайшую пожарную часть, приступить к тушению очага возгорания с помощью первичных средств пожаротушения.
3.1.5.23. В случае если разбилась лабораторная посуда или приборы из стекла, не собирать их осколки незащищенными руками, а использовать для этой цели щетку и совок.
3.1.5.24. При получении травмы оказать первую помощь пострадавшему и сообщить администрации учреждения, при необходимости отправить пострадавшего в ближайшее лечебное учреждение.
3.1.6. Техника безопасности для учащихся при работе с микроскопом.
Общие требования.
3.1.6.1. Данная инструкция предназначена для учащихся при выполнении в лаборатории биологии работ, связанных с использованием микроскопа.
3.1.6.2. При работе в лаборатории биологии возможно воздействие следующих опасных и вредных факторов:
Уколы частей тела при небрежном обращении с препаровальными иглами;
Порезы рук при небрежном обращении с предметными и покровными стёклами.
Требования безопасности перед началом работы.
3.1.6.3. Ученик внимательно изучает содержание и порядок выполнения лабораторной работы, безопасные приёмы её выполнения.
3.1.6.4. Все работы выполняются только с разрешения и под контролем учителя.
3.1.6.5. Ученик освобождает рабочее место от посторонних предметов.
3.1.6.6. Ученик повторяет с правила работы с микроскопом.
Требования безопасности во время работы.
3.1.6.7. Ученик должен точно соблюдать порядок действий.
3.1.6.8. Ученик должен соблюдать осторожность при работе с препаровальными иглами, предметными и покровными стёклами.
3.1.6.9. Ученик приступает к работе только тогда, когда убедился в исправности микроскопа.
3.1.6.10. Учащийся не берёт без разрешения учителя биологии микроскоп, препараты и другое оборудование с других рабочих мест.
3.1.6.11. Учащийся не выносит из кабинета микроскоп, предметные и покровные стёкла, препаровальные иглы и пинцеты.
Требования безопасности по окончании работ.
3.1.6.12. По окончании работы ученик собирает предметные и покровные стёкла, препаровальные иглы, пинцеты, протирает салфеткой и укладывает в предназначенные для этого емкости. Затем сдаёт всё учителю на хранение. Протирает объектив и окуляр микроскопа салфеткой, выводит микроскоп из рабочего состояния.
3.1.6.13. По окончании работы ученик приводит своё рабочее место в порядок и сдает лаборанту или учителю.
3.1.6.14. После окончания работы обязательно тщательно вымыть руки с мылом.
Требования безопасности в аварийных ситуациях.
3.1.6.15. В случае выявления неисправностей в приборах и оборудовании следует немедленно остановить работу группы и при необходимости оповестить администрацию.
3.1.7. Памятка по работе с микроскопом с иммерсионным объективом.
Сухие и иммерсионные объективы.
3.1.7.1. Объективы малого увеличения (3 х, 5 х, 8 х, 9 х, 10 х) применяют главным образом для предварительного осмотра препарата. Объективы среднего увеличения (20 х, 40 х, 60 х) – для изучения крупных клеток микроорганизмов (например, грибов). Эти объективы называют сухими, поскольку при микроскопии между фронтальной линзой и препаратом находится воздух. Вследствие различия показателей преломления воздуха (n = 1) и стекла (n = 1,52) часть лучей, освещающих препарат, рассеивается и не попадает в объектив.
3.1.7.2. Объективы больших увеличений (85 х, 90 х) называются иммерсионными. Их применяют для изучения мелких форм микроорганизмов (например, бактерий). При работе с ними препарат должен быть максимально освещен. Светорассеивание, неизбежное при работе с объективами, в данном случае устраняется благодаря использованию иммерсионных жидкостей, показатель преломления которых близок к показателю преломления стекла. Чаще всего используют кедровое масло, у которого n=1,515. Каплю жидкости наносят на препарат и погружают в нее объектив. Короткое фокусное расстояние объективов большого увеличения ((1,9 - 2,1)мм) позволяет исследовать объект, не поднимая объектив из капли, вследствие чего создается однородная среда между линзой и препаратом.
Правила работы с иммерсионной системой микроскопа.
Начало работы.
3.1.7.3. Установить микроскоп на малое увеличение (х8).
3.1.7.4. Навести максимальную освещенность.
3.1.7.5. Установить исследуемый препарат на предметный столик и закрепить его зажимами.
3.1.7.6. Найти изображение предмета на малом увеличении (х8).
3.1.7.7. Нанести на препарат каплю иммерсионной жидкости.
3.1.7.8. Установить микроскоп на большое увеличение (х90) до щелчка.
3.1.7.9. Под контролем глаза микровинтом опустить объектив микроскопа максимально вниз, пока он не коснется иммерсионной жидкости.
3.1.7.10. Наблюдая в окуляр, поднимать макровинтом вверх тубус до тех пор, пока не появится изображение предмета.
3.1.7.11. Микровинтом установить более четкое изображение.
3.1.7.12. Провести микроскопию препарата-мазка.
I . Виды аварийных ситуаций.
Приказы, нормативные документы о профилактике ВИЧ-инфекции, безопасности работы
среднего медицинского персонала.
Медицинские работники должны иметь четкое представление о том, что такое аварийная ситуация, угрожающая их здоровью.
Аварийные ситуации могут быть двух видов:
1. Аварийные ситуации, связанные с контактом с кровью и другими биологическими жидкостями.
2. Аварийные ситуации, связанные с разливом и разбрызгиванием крови и других биологических жидкостей.
К аварийным ситуациям относят:
· повреждение кожных покровов мед. инструментарием во время манипуляции, при его обработке
· попадание потенциально инфицированного материала на кожу, слизистые
· разбрызгивание крови при центрифугировании
· разрывы и проколы перчаток при проведении манипуляций, при обработке использованного инструментария
Для профилактики возникновения аварийных ситуаций СМР в профессиональной деятельности должны руководствоваться следующими приказами, нормативными актами:
1) Приказом № 170 «О мерах по совершенствованию профилактики и лечения ВИЧ инфекции в РФ»
2) Санитарными правилами о «Безопасности работы с микроорганизмами 3-4 групп патогенности»
3) Инструкциями по противоэпидемическому режиму в лабораториях диагностики СПИД
5) Руководствоваться положением по методике проведения дезинфекции, ПО, стерилизации изделий медицинского назначения согласно ОСТа
6) Все манипуляции выполнять согласно разработанным стандартам, знать методы и условия транспортировки инфицированного материала
правил универсальных мер безопасности медицинского персонала от инфекций
Пути заражения медперсонала
Естественный Искусственный
Наиболее остро стоит вопрос об опасности заражения медперсонала гемоконтактными инфекциями, т.е. вирусными гепатитами и ВИЧ-инфекцией. К сожалению, в настоящий момент мед. работники не придают должного значения личной защите во время работы, в основном фокусируя свои усилия на безопасности пациента. Тем не менее, медицинская сестра должна всегда относится к пациентам, как потенциально инфицированным, а любой биологический материал (кровь и ее компоненты) рассматривать как потенциально зараженные.
7 правил универсальных мер безопасности
медперсонала от инфекций.
1. Мыть руки до и после любого контакта с пациентом
2. Все манипуляции выполнять в резиновых перчатках
3. Сразу после применения использованные шприцы и катетеры помещать в специальные контейнеры «для утилизации острых предметов», никогда не снимать со шприцов использованных игл и не производить никаких манипуляций с ними.
4. Пользоваться средствами защиты глаз и масками для предотвращения возможного попадания брызг крови и жидких выделений в лицо
5. Использовать специальную влагонепроницаемую одежду для защиты тела от возможного попадания брызг крови или жидких выделений.
6. Рассматривать все белье, запачканное кровью или жидкими выделениями, как потенциально инфицированное
7. Рассматривать все образцы лабораторных анализов как потенциально инфицированные
Аптечка АНТИ-СПИД
Все рабочие места должны быть обеспечены дезинфицирующим раствором и аптечкой АНТИ-СПИД:
Данная аптечка должна быть укомплектована
1. Градуированным мерным стаканом до 200,0 мл – 2 шт
2. Спиртовой настойкой йода 5% - 50,0
3. 1% раствором борной кислоты 50,0 мл
4. 70 0 спиртом, в объеме 200,0
5. Бактерицидным пластырем – 1 шт
6. Стерильными марлевыми салфетками 10 шт
7. Бинтом марлевым стерильным -2шт
8. Пипетки глазные 2 шт
9. Ватой хирургической 50,0 гр
За наличием и укомплектованностью данной аптечки следит старшая медицинская сестра отделения.
3. Тактика действий медработников при возникновении различных видов аварийных ситуаций, статистические данные о степени возможного инфицирования в аварийных ситуациях
Вероятность заражения мед. работника
при попадании крови, биологических жидкостей пациента в глаза, на слизистую носа или полость рта
составляет 0,09%
1. При попадании крови, биологических жидкостей пациента на слизистую оболочку глаз необходимо:
1. Промыть глаза водой или 1% раствором борной кислоты
2. Раствор налить в 2 глазные ванночки, опустить в них глаза, и моргая, промыть их в течение 2 минут
3. Осушить глаза одноразовой салфеткой
4. Закапать в каждый глаз 1-2 капли 20% альбуцида (в случае раздражения глаз)
2. При попадании крови, биологических жидкостей пациента
на слизистую носа
1. Нос обильно промыть водой
2. Лицо вытереть чистой одноразовой салфеткой
3.При попадании крови, биологических жидкостей пациента на слизистую ротовой полости необходимо:
1. Набрать в рот 70% спирт, прополоскать в течение 2-х минут или 1% раствором борной кислоты
Вероятность заражения мед. работника при попадании крови, биологических жидкостей пациента на открытые неповрежденные участки тела составляет 0,05%
4. При попадании крови, биологических жидкостей пациента на неповрежденные участки кожи рук, других открытых участков тела, кроме лица необходимо:
1. Снять кровь с кожи тампоном смоченным 70% спиртом, либо 3% р-ром хлорамина.
2. Двукратно вымыть участки кожи теплой водой с мылом, насухо вытереть полотенцем
3. Повторно обработать 70% спиртом
5.При попадании крови и других биологических
жидкостей на кожу лица
Одновременно обработать слизистые глаз, носа, ротовой полости по продемонстрированной методике
6.При загрязнении перчаток кровью
1. Обработать тампоном смоченным 70% спиртом.
2. Вымыть руки под проточной водой
3. Снять перчатки, замочив их в дез. растворе 3% хлорамине, 6% перекиси водорода, 0,2% сульфохлорантина на 60 минут
4. Осуществить гигиенический уровень обработки рук, обработать руки кожным антисептиком.
2 способ
1. Руки в перчатках опустить в дез раствор, подержать
2. Вынув руки снять аккуратно перчатки, замочив их дез. растворе
3. Осуществить гигиенический уровень обработки рук, обработать руки кожным антисептиком.
Вероятность заражения мед. работника ВИЧ-инфекцией при порезе, уколе загрязненными инструментами составляет 0,3%-0,5%, вирусным гепатитом – 6-30%
 |
7.При повреждениях (уколах, порезах) кистей рук необходимо:
1. Немедленно снять перчатки (быстро, но аккуратно замочить в 3% р-ре хлорамина, 6% перекиси водорода, 0,2% сульфохлорантина на 60 минут)
2. Выдавить кровь из ранки
3. Снять ее тампоном, смоченным 70% спиртом
4. Если позволяет рана осуществить гигиенический уровень обработки рук (вымыть руки с мылом под проточной водой)
5. Оработать руки 70 % спиртом
6. Обработать ранку 5% р-ром йода, заклеить бактерицидным лейкопластырем
7. Одеть перчатки, продолжить работу
8.При загрязнении кровью и другими биологическими жидкостями одежды:
1. Аккуратно загрязненной стороной во внутрь снять халат
2. Замочить в дез. растворе 3% р-ре хлорамина, 0,2% р-ре сульфохлорантина на 2 часа
3. Кожу под халатом обработать тампоном, смоченным 70% спиртом
4. Осуществить гигиенический уровень обработки рук
5. Одеть чистый халат, перчатки, продолжить работу
6. Через 120 минут (2 часа) ополоснуть халат под проточной водой до исчезновения запаха, сдать его в прачечную
9.При попадании крови на мебель (кушетку, стул), обувь
1. Ветошью смоченной дез. раствором 3% хлорамином, 6% перекисью, 0,2% сульфохлорантином загрязненную поверхность протереть 2-х кратно с интервалом в 15 минут.
2. Ветошь после обработки замочить в дез р-ре
3. Ополоснуть под проточной водой до исчезновения запаха
4. Высушить
10.При попадании крови на пол (разбилась или опрокинута пробирка, носовое кровотечение) необходимо:
1. Надеть перчатки (если они не были одеты)
2. Ограничить место аварии
3. Залить дезинфицирующим раствором (концентрация по режиму, предусмотренному для инактивации вирусов гемоконтактных гепатитов) на время экспозиции
4. После экспозиции собрать разбитую емкость с помощью совка и щетки и поместить в отходы класса Б;
5. Снять перчатки, утилизировать в соответствии с требованиями безопасности.
11. В случае повреждения пробирки с кровью во время работы центрифуги:
1. Крышку открывать медленно, только через 40 минут после полной остановки
2. Все центрифужные стаканы и разбитое стекло поместить в дезинфицирующий раствор (концентрация по режиму, предусмотренному для инактивации вирусов гемоконтактных гепатитов) на время экспозиции.
3. Внутреннюю и наружную поверхность центрифуги и крышки обработать салфеткой с дезинфицирующим раствором двукратным протиранием с интервалом 15 мин.
Правила регистрации возникших аварийных ситуаций, в журнал «Учета и регистрации аварий с кровью или биожидкостями пациента», химиопрофилактика.
После проведенных профилактических мероприятий необходимо:
1. Поставить в известность руководителя подразделения, его заместителя или вышестоящего руководителя
2. Травмы, полученные медработниками, должны учитываться в каждом ЛПУ и актироваться, как несчастный случай на производстве с составлением Акта о несчастном случае.
3. Провести регистрацию аварии в журнале аварийных ситуаций, который хранится на рабочем месте
Форма журнала аварийных ситуаций
4. Провести клиническую оценку риска инфицирования ВИЧ
· Характер повреждения (тип иглы (полая, сплошная), глубина проникновения, оценка объема крови, введенной с иглой, степень разрыва тканей, контакт со слизистой оболочкой, контакт с поврежденным участком кожи;
· Источник инфекции: кровь, продукты крови, жидкости организма, околоплодные воды и т.д.
· Характеристика пациента источника: стадия ВИЧ-инфекции, вирусная нагрузка
5. Провести химиопрофилактику парентерального заражения ВИЧ немедленно.
6. Постановка на учет в ГБУЗ НСО «Центр СПИД», снимается с учета по получении отрицательных результатов обследования на ВИЧ в течении 3,6,12 месяцев.
Похожая информация.
При работе с патологическим материалом, содержащим микробы, и особенно при культивировании патогенных микробов во избежание заражения персонала лаборатории необходимо соблюдать правила техники биологической безопасности. В зависимости от степени патогенности и контагиозности возбудителей принято выделять четыре уровня биологической опасности и соответствующих мероприятий, необходимых для предупреждения заражения в лаборатории.
Первый уровень (работа с непатогенными микроорганизмами). Необходимо соблюдение стандартных правил (см. тему 1.1).
Второй уровень (работа с низковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование лабораторной одежды и защитных перчаток; обязательное обеззараживание всех загрязненных отходов; ограничение доступа в лабораторию. Для предотвращения попадания микробов в воздух рабочего помещения выполнение механических манипуляций, сопряженных с высокой вероятностью распыления микроорганизмов, необходимо осуществлять в специализированных закрытых легкодезинфици-руемых настольных боксах.
Третий уровень (работа с высоковирулентными микроорганизмами). К числу дополнительных правил и мероприятий относятся использование специальной защитной лабораторной одежды; контроль доступа в лабораторию. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных боксах.
Четвертый уровень (работа с возбудителями ООИ). Работа с возбудителями особо опасных инфекций (ООИ) разрешена исключительно в специализированных режимных лабораториях,
Имеющих оборудование, необходимое для эффективной защиты от патогенных микробов, их контроля и уничтожения. К числу дополнительных правил и мероприятий относятся наличие отдельных помещений для смены лабораторной одежды и душевых, обязательное обеззараживание всех отходов лаборатории. Все манипуляции с патологическим материалом необходимо осуществлять в специализированных настольных боксах, снабженных системами стерилизации воздуха (см. тему 7.1).
■ ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Обнаружение патогенных микроорганизмов, являющихся возбудителями заболеваний (например, микобактерии туберкулеза, гонококки и др.), имеет решающее значение для постановки диагноза.
Выявление роли условно-патогенных микроорганизмов в этиологии и патогенезе заболеваний должно быть основано на строгой аргументации. Обязательным условием является клиническое, эпидемиологическое, микробиологическое и серологическое исключение возбудителей инфекционных болезней (например, возбудителей кишечных инфекций, венерических болезней и др.). Для оценки роли условно-патогенных микроорганизмов в патологии могут быть использованы следующие критерии.
1. Выделение микроорганизмов из крови, спинномозговой жидкости или других жидкостей организма, которые в норме у здоровых людей являются стерильными.
2. Обнаружение в исследуемом материале, особенно при дисбактериозах, условно-патогенных микроорганизмов в достаточно больших количествах (например, 10 5 -10 7 микробных клеток в 1 мл). Для этого проводят количественное определение микроорганизмов по числу КОЕ в 1 г или 1 мл испытуемого образца. Эти количественные показатели могут варьировать в зависимости от вида микроорганизмов, типа исследуемого материала, характера и стадии заболевания.
3. Повторное, многократное (в течение суток или через сутки) выделение одного и того же микроорганизма из одного и того же материала от больного (например, из крови при сепсисе и т.д.).
4. Обнаружение идентичных условно-патогенных микроорганизмов в разных образцах материала (например, при пищевых токсикоинфекциях - в промывных водах желудка, рвотных массах, испражнениях, пищевых продуктах).
5. Нарастание титра антител в 4 раза и более в парных сыворотках крови больного в отношении условно-патогенного микроорганизма, который предполагается как возбудитель дан-
ного патологического процесса. В ряде случаев рекомендуется использовать в качестве антигенов аутоштаммы микроорганизмов, выделенные от больных.
6. Положительные кожно-аллергические реакции у больных с аллергенами, приготовленными из условно-патогенных микроорганизмов.
7. В случае внутрибольничных (нозокомиальных) инфекций - выделение идентичных культур микроорганизмов от группы больных.
8. Совпадение данных лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с эффективностью антимикробной терапии в клинических условиях, подтверждаемое улучшением состояния больного и уменьшением количества или элиминацией соответствующих микроорганизмов.
9. Условно-патогенные микроорганизмы (синоним: оппортунистические) представляют собой большую группу микроорганизмов, занимающих различное систематическое положение. Они встречаются среди аэробных и анаэробных бактерий, грибов, простейших. В клинической микробиологии наиболее часто встречаются условно-патогенные микроорганизмы, относящиеся к родам Staphylococcus, Streptococcus, Escherichia, Klebsiella, Proteus, Entewbacter, Citrobacter, Serratia, Pseudomonas, Haemophilus, Bacteroides, Veillonella, Vibrio, Peptococcus, Peptostreptococ-cus, Mycobacterium, Mycoplasma, Candida и др.
■ ОФОРМЛЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ЛАБОРАТОРНЫХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Результаты лабораторных исследований оформляют на специальных бланках, которые передают лечащему врачу.
1. В ответе прежде всего указывают наличие патогенных, а также условно-патогенных микроорганизмов, обнаруженных при микробиологическом исследовании. Сообщают также данные лабораторного определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам.
2. При обнаружении микробных ассоциаций перечисляют все микроорганизмы, указывают доминирующие виды и количественные микробиологические показатели.
3. В соответствии с правилами международной номенклатуры в ответах приводят видовые названия микроорганизмов, например: Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и т.д.
4. С целью ускорения лабораторных исследований в ряде случаев при выделении условно-патогенных микроорганизмов вполне допустимо в ответе ограничиться указанием только родовой принадлежности обнаруженных микроорганизмов, например Proteus sp., Candida sp. и т.д.
Аэробные бактерии Грамположительные бактерии
Chryseobacterium indologenes Chryseobacterium meningosepticum Enterococcus faecalis и другие виды Enterococcus Erysipelothrix rhusiopathiae Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Staphylococcus saprophiticus и другие виды Staphylococcus Streptococcus pyogenes Streptococcus agalactiae
Грамотрицательные бактерии
Burkholderia cepacia Citrobacter koseri Edwardsiella tarda Eikenella corrodens Enterobacter spp. Escherichia coli Haemophilus influenzae Klebsiella spp. Listeria monocytogenes Moraxella catarrhalis Proteus vulgaris Proteus mirabilis Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas putida Pseudomonas fluorescens Salmonella enterica
подвид enterica биовар typhimurium Serratia spp. Spirillum minus Streptobacillus moniliformis Vibrio vulnificus
Анаэробные бактерии
Неспорообразующие грамотрицательные анаэробы
Bacteroides fragilis
и другие виды рода Bacteroides
Prevotella melaninogenica
и другие виды рода Prevotella
Porphiromonas spp.
Fusobacterium spp.
Veilonella spp.
Неспорообразующие грамположительные анаэробы
Peptostreptococcus spp. Propionibacterium acnes
Спорообразующие грамположительные анаэробы
Clostridium perfringens Clostridium novyi Clostridium septicum Clostridium histolyticum Clostridium ramosum Clostridium sporogenes Clostridium tetani
Бактерии, перечисленные выше, вызывают гнойно-воспалительные процессы различной локализации, в том числе ангины, фурункулы, циститы и пиелиты, плевриты, перикардиты, сепсис и др. Многие из этих возбудителей встречаются в нормальной микрофлоре человека и проявляют свою патогенность только при нарушении нормальной экологии.
Стафилококки, стрептококки, протей, эшерихии и анаэробные бактерии нередко вызывают смешанную инфекцию как в разнообразных сочетаниях между собой, так и с другими микроорганизмами - вирусами, грибами.
Тема 12.1. АЭРОБНЫЕ БАКТЕРИИ -ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ И РАНЕВЫХ ИНФЕКЦИЙ
▲ Программа
1. Биологические свойства возбудителей гнойно-воспалительной и раневой инфекции, их патогенность, экология, особенности инфекции и эпидемиология вызываемых заболеваний.
2. Микробиологическая диагностика.
3. Диагностические препараты, профилактические и лечебные препараты.
А Демонстрация
1. Рост а- и р-гемолитических стрептококков на кровяном агаре.
2. Рост и образование пигмента P.aeruginosa на агаре.
3. Диагностические и лечебно-профилактические препараты.
ЗАНЯТИЕ 1
▲ Задание студентам
1. Микроскопировать и зарисовать мазки из чистых культур возбудителей гнойных инфекций: S.aureus, S.pyogenes, P.aeruginosa, E.coli, P.vulgaris. Окраска по методу Грама.
2. Микроскопировать и зарисовать мазки из гноя, содержащие возбудителей: стафилококков, стрептококков. Окраска по методу Грама.
3. Ознакомиться с питательными средами, применяемыми при микробиологической диагностике гнойных и раневых инфекций. Указать назначение отдельных питательных сред.
4. Микробиологическое исследование при раневых и гнойных инфекциях:
а) указать материал, подлежащий исследованию;
 |
 |
б)
микроскопический метод: микроскопировать мазок
из гноя, окраска по методу Грама. Сделать вывод;
в) наметить план дальнейшего исследования.
ЗАНЯТИЕ 2
Задание студентам
1. Микробиологическое исследование гноя:
а) учесть результат посева гноя на кровяной агар в
чашке Петри, описать подозрительные колонии,
отметить наличие гемолиза, составить план даль
нейшего исследования;
б) учесть результаты определения лецитиназы и плаз-
мокоагулазы у выделенной культуры стафилококка.
Сделать вывод;
в) учесть результаты определения чувствительности
культуры стафилококка к антибиотикам. Сделать
вывод.
2. Микробиологическое исследование мочи. Определить количество бактерий в 1 мл мочи по результатам метода секторных посевов. Дать заключение.
3. Серодиагностика ревматизма. Ознакомиться с описанием стрептолизиновой реакции. Внести в протокол результаты определения анти-О-стрептолизина в сыворотке крови больного. Сделать вывод.
4. Дать краткую характеристику демонстрируемым антимикробным, диагностическим и лечебно-профилактическим препаратам.
Методические указания
Материал для исследования: раневое отделяемое, гной, экссудат, моча, мазки со слизистых оболочек (носоглотки, зева и др.), кровь при подозрении на сепсис.
Микробиологическая диагностика стафилококковых инфекций МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование (схема 12.1.1). Из исследуемого материала (за исключением крови) готовят мазки для первичной бактериоскопии, окрашивают по методу Грама и микроскопируют. Наличие в препаратах грамположительных кокков, располагающихся в виде гроздевидных скоплений (рис. 12.1.1; на вклейке), позволяет поставить предварительный диагноз стафилококковой инфекции. Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2-3 бактерии.
Бактериологическое исследование. Испытуемый материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром
Рис. 1.4. Культура дрожжей Sac--charomyces cerevisiae при разных методах микроскопии К с. 14. а - микроскопия мазка, окрашенного метиленовым синим; б - тем-нопольная микроскопия; в - фазо-во-контрастная микроскопия- г - люминесцентная микроскопия. Окраска корифосфином.
Рис.2.2.1. Смесь стафилококков и кишечных палочек. К с. 23. Окраска по методу Грама.
 |
 |
Рис.3.2.1. "Пестрый ряд". К с. 46.
а - ферментация углевода до кислоты и газа; б - отсутствие ферментации;
в - образование индола; г - образование сероводорода.
Рис.6.2. Постановка опыта специфической трансдукции (схема).Я" с. 26
пп™Ь Г i dga " ; б ~ реципиент E - coli 1ас "; в - Рост колоний реципиентного „» рп Т^- ВДо; г *" ^Раженная транслирующим фагом X dgal культура b.coli lac ; д - рост колоний трансдуктантов (красного цвета), несущих ген gal, на среде Эндо.
Рис.6.1. Постановка опыта трансформации. К с. 68. контает С пе?™г5 НК " в ™ еленно? из B.subtilis; б - реципиент B.subtilis; в -
селенной с^Л ЫХ ба,СГерИЙ С ДНК; Г ~ рост колоний Рекомбинантов на штамма н L?™ со й С1 Р ептоми «ином; д - отсутствие роста реципиентного 1мма на селективной среде со стрептомицином; е - рост колоний реципиентного штамма на среде без стрептомицина.
 |
Рис.6.3. Постановка опыта по конъюгации. К с. 70. а - рост колоний бактерий донора на минимальной среде без стрептомицина; б - рост колоний рекомбинантов на селективной среде со стрептомицином без лейцина; в - рост колоний бактерий реципиентов на полной среде со стрептомицином и лейцином; г - отсутствие роста бактерий донора на среде со стрептомицином; д - донор-культура E.coli F , lei , su 5 ; е - контакт между бактериями донора и реципиента; ж - реципиент-культура E.coli F", lei", st/; з - отсутствие роста бактерий реципиента на селективной среде со стрептомицином без лейцина.
 |
 |
Рис. 12.1.1. Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes в гное. Окраска по методу Грама. К с. 160.
Рис. 12.2.1. Clostridium perfringens в отечной жидкости. К с. 174.
Рис.19.1.1. Тельца Бабеша -Нег-ри в нейронах гиппокампа. Срез головного мозга человека. К с. 305. Окраска по методу Романовского - Гимзы.
(ЖСА) для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза (рис. 12.1.2; на вклейке). На ЖСА S.aureus образует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих ле-цитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. Для окончательного установления вида стафилококка 2-3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последующим определением их дифференциальных признаков (табл. 12.1.1).
Таблица 12.1.1. Дифференциальные признаки стафилококков
| Вид |
| S.aureus |
| S.sapro-phyticus |
S.epider-midis
Образование:
плазмокоагулазы + - -
лецитиназы + - -
альфа-токсина + - -
Ферментация:
глюкозы + + -
маннита в анаэробных условиях + - +
Чувствительность к новобиоцину S S R
Условные обозначения:(+) - наличие признака; (-) - отсутствие признака; S - чувствительный; R - резистентный.
Для постановки реакции на плазмокоагулазу плазму крови, разведенную в 2 раза, разливают по 0,4 мл в пробирки, вносят туда по одной петле каждой исследуемой культуры стафилококка и помещают в термостат при 37 °С. Через 2, 4 и 24 ч отмечают результаты опыта. При наличии плазмокоагулазы образуется сгусток. В некоторых случаях наряду с плазмокоагу-лазой и лецитиназой определяют фибринолизин, гиалуронидазу, ДНКазу.
Для установления источника внутрибольничной инфекции выделяют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионосителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых бактериофагов. Фаги разводят до титра, указанного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а затем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно размеченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 "С. Результаты оценивают на следующий день по наличию лизиса культуры (см. рис. 5.3.2).
Определение чувствительности стафилококка к антибиотикам - см. тему 7.2.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические, биохимические и молекулярно-биологические исследования.
Иммунохимические исследования. Основаны на обнаружении антигенов (токсинов и ферментов) возбудителя в материале от больного с помощью чувствительных серологических реакций.
Биохимические и молекулярно-биологические исследования. Исследуемый материал, полученный из очага инфекции, используют для обнаружения ДНК возбудителя с помощью ПЦР. В случае обнаружения соответствующих молекул можно поставить предварительный диагноз.
Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций (схема 12.1.2)
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Бактериоскопическое исследование. Мазки для первичной бактериоскопии готовят из патологического материала (за исключением крови), окрашивают по методу Грама и микроско-пируют. При положительном результате обнаруживают цепочки грамположительных кокков (см. рис. 12.1.1). Следует иметь в виду, что в патологическом материале стрептококки редко образуют типичные скопления, чаще располагаются поодиночке или небольшими группами по 2-3 бактерии.
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на кровяной агар в чашку Петри. После инкубации при 37 "С в течение 24 ч отмечают характер колоний и наличие вокруг них зон гемолиза. Из части материала, взятого из колоний, готовят мазок, окрашивают по методу Грама и микро-скопируют. Для получения чистой культуры 1-3 подозрительные колонии пересевают в пробирки со скошенным кровяным агаром и сахарным бульоном. На кровяном агаре Streptococcus pyogenes образует мелкие, величиной с булавочную головку, мутноватые круглые колонии. В бульоне стрептококк в отличие от стафилококка дает придонно-пристеночный рост в виде хлопьев или зерен, оставляя среду прозрачной.
По характеру гемолиза на кровяном агаре стрептококки делятся на три группы: 1) негемолитические; 2) aj-гемолитические, или зеленящие, образующие зеленоватую зону частичного гемолиза; 3) р-гемолитические, образующие вокруг колонии полностью прозрачную зону гемолиза.
Заключительным этапом бактериологического исследования является идентификация выделенной культуры по антигенным свойствам (табл. 12.1.2). Серогруппу стрептококков определяют в реакции преципитации с экстрактом из исследуемой культуры (полисахаридным преципитиногеном С) и группоспецифи-
 |
ческими сыворотками (обычно 4 наиболее распространенные серогруппы - А, В, С и D). Развернутое серологическое исследование и типирование стрептококков проводят главным образом для эпидемиологического обследования.
Таблица 12.1.2. Дифференциальные признаки стрептококков
| Вид | Рост при | Рост на средах, содержащих | желчь (40%) | |
| 10"С | 45 °С | метиленовый синий (0,1 %) | хлорид натрия (6,5 %) |
Требования биологической безопасности:
Весь материал считается потенциально инфицированным. При работе с биологическим материалом необходимо соблюдать следующие правила:
· распаковку присланного в лабораторию материала проводят в индивидуальных средствах защиты (халаты, перчатки)
· после окончания работы проводят дезинфекцию расходных материалов, рабочих мест, помещений лаборатории в резиновых перчатках
o поверхность столов после окончания работы обрабатывают дезинфицирующим раствором, при случайном попадании биологического материала на окна, шкафы, стены места загрязнения протирают дезинфицирующим раствором
o Медицинские отходы из текстильных материалов (одноразовая одежда персонала, маски и пр.) замачивают в дезрастворе средства в течение 3-х часов, затем утилизируют. Одноразовые изделия медицинского назначения погружают в дезраствор средства на 60 мин, затем утилизируют.
o Лабораторные инструменты, иглы, капилляры, предметные стекла, посуда и т.д., после каждого использования должны подвергаться дезинфекции.
· после окончания работы сотрудники обрабатывают руки дезинфицирующим раствором(70% спирт), затем моют в теплой воде с мылом
Дезинфицирующие растворы используются однократно.
Емкости с растворами дезинфицирующих, моющих и стерилизующих средств должны быть снабжены крышками, иметь четкие надписи с указанием названия средства, его концентрации, назначения, даты приготовления (для готовых к применению средств, разрешенных для многократного использования, указывают дату начала использования средства).
Отходы класса Б и В должны быть подвергнуты обязательной дезинфекцией перед сбором в одноразовую упаковку непосредственно на местах первичного сбора отходов методом погружения в дезинфицирующий раствор, подготовленный в специально выделенной для этой цели емкости.
Дезинфекция отходов классов Б и В производится в соответствии с действующими нормативными документами.
Для дезинфекции следует использовать зарегистрированные Минздравом России и рекомендованные к применению в медицинских учреждениях дезинфицирующие средства в концентрациях и времени экспозиции, указанных в соответствующих рекомендациях по их использованию. Дезинфекция производится в пределах медицинского подразделения, где образуются отходы данного класса.
Большая часть отходов ПАО - влажный архив или нефиксированный материал после биопсийных и аутопсийных исследований, гистологические препараты и блоки, подлежащие уничтожению после временного хранения - относится к отходам класса Б - потенциально инфицированные отходы, материалы и инструменты.
Все отходы, класса Б после дезинфекции (если они не были фиксированы в формалине и других фиксирующих жидкостях) собираются в одноразовую герметичную упаковку. Мягкая упаковка (одноразовые пакеты) закрепляется на специальных стойках (тележках). После заполнения пакета примерно на ¾ , его герметизируют.
Гистологические препараты (стекла), иглы, ножи и др. (после дезинфекции) собираются в отдельную одноразовую твердую тару.
Одноразовые емкости (пакеты, баки) с отходами класса Б маркируются надписью "Опасные отходы. Класс Б" с нанесением кода подразделения ЛПУ, названия учреждения, даты и фамилии ответственного за сбор отходов лица. Не допускается перенос (перекладывание, пересыпка) отходов класса Б из одной емкости в другую.
Герметичная одноразовая тара с отходами класса Б в дальнейшем утилизируется путем кремации (термическое обезвреживание). При невозможности кремации эпидемиологически безопасные органические отходы патологианатомических отделений захораниваются на кладбищах в специально отведенных местах.
Твердые острые предметы (гистологические препараты) утилизируются централизованно, после дезинфекции вывозятся на полигон твердых бытовых отходов.
Отходы класса В - любые отходы, имевшие контакт с микроорганизмами 1-2 групп патогенности, от пациентов с анаэробной инфекцией, туберкулезом. Обязательно подлежат дезинфекции в соответствии с действующими нормативными документами.
Отходы класса Г - химические токсичные вещества, просроченные дезсредства, использованные люминисцентные лампы собираются в закрытые герметичные емкости. После заполнения емкости герметизируются и хранятся во вспомогательных помещениях. Вывозятся специализированными предприятиями.
